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Siembra y germinación de orquídeas in-vitro

Tema en '11. Orquídea' comenzado por arturo uno, 21/9/14.

  1. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    Jose,
    expulsas el agua oxigenada de la jeringa - si quieres ir por seguro a través de un tapón de algodón que previamente has hecho - sin expulsar las semillas y la desechas. Absorbes agua destilada para lavar - igualmente con mucho cuidado - agitas el líquido y lo vuelves a desechar con cuidado de no echar las semillas, y así varias veces. NO PASAS LAS SEMILLAS, LAS SEMILLAS SIEMPRE SE QUEDAN EN LA JERINGA, hasta el último paso. Sin tocar con los dedos la salida de la jeringa, sin apoyar la jeringa en ningún sitio que no esté previamente desinfectado... bueno, lo habrás visto en las fotos.:O_o:

    Es laborioso. Por eso recomendé en otro post, si ya tenía los frascos hechos, ensayar con cualquier otra semilla fina para aprender los movimientos y la rutina de trabajar higiénicamente.

    José,
    es útil apuntarte los pasos, paso por paso en un papel que tienes al lado cuando vayas a hacer la siembra. Junto a todos los utinsilios que vas a tener que usar. Asi, sin tener que mover mucho aire, sin tener que interrumpir la rutina, si tener que descontaminar una y otra vez, tienes todo a mano y a vista.


    [​IMG]
  2. jose

    jose

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    Pero si pongo un algodon las semillas se quedan en el algodon
  3. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    Jose,
    - mantienes la jeringa con la apertura hacía arriba/la arrimas en un vaso
    - las semillas se posan en el suelo
    - manteniendo la posición, echas el líquido - las semillas siguen en el suelo
    - tomas agua para lavar
    - esperas a que la semillas se posen en el suelo ...


    Nadie dijo que fuera simple...


    [​IMG]
  4. jose

    jose

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    ok gracias
  5. Alwii mtz

    Alwii mtz

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    hola, queria saber, ¿se puede hacer el medio de cultivo sin vitamina b1?, o se puede utilizar complejo b?
  6. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    El medio de M&S lleva 0,1mg/l de thiamina. La mayoría de medios caseros no suele llevar. Hay quien le pone 1200mg/l ...
    Alwii mtz da las Gracias.
  7. M3M0

    M3M0

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    @arturo uno me podrias explicar este paso?


    El film es previamente desinfectado?
    Las cantidades de este medio están bien?

    Medio de Tomate con Plátano;
    Plátano (puré) – 40g
    Jugo de tomate – 100ml
    Agar-Agar – 10g
    Azúcar común – 15-20g
    Tiamina – 1,2g
    Agua destilada – 900ml

    De antemano gracias! será mi primer in-vitro bien echo y quiero asegurarme de que este todo bien :okey:
  8. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    Pues suerte con tu siembra!
    Por partes:

    -10 g de agar-agar en un litro me parece mucho, quedaría muy espeso PERO: yo nunca utilizo tanto tomate; el tomate es muy ácido y es posible que esto a la hora de gelificar cause cambios. Yo eso no sabría decirte con certeza, por no haberlo hecho. No te quedará mas que meterte en algunos enlaces de gente que ha usado tomate y comparar las cantidades de agar. Yo suelo usar hasta 5 g por litro. (Si te quedara demasiado líquido con esta cantidad, no pasa nada: lo vuelves a calentar añadiendo algo mas de agar. Todo el proceso de esterilización viene después.)
    - 1,2 g (gramos) de Thiamina es mucho. El medio mas utilizado (P668) lleva 10mg por litro (MILIGRAMOS), 120 veces menos. La tiamina y todas las hormonas actúan distinto según la concentración. Hay que ser exacto en esto.

    El film no está desinfectado. ¿porqué? Está en el exterior del frasco, su función es mantener el algodon empapado con una minigota de lejía en su sitio.
    M3M0 da las Gracias.
  9. M3M0

    M3M0

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    Gracias! que suerte que me dices, y la gota de lejía, como es su función o como la aplico? ya que no había oído hablar de eso.

    Y...alguna formula mas precisa de plátano y tomate? ya que todas las que encuentro son similares :?, te lo agradecería mucho :Biggrin:

    Saludos!
  10. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    No entiendo bien tu pregunta ...
    La esterilización/decomtaminación sería un término mejor, de las semillas por lo general se hace en jeringuilla con hipoclorito sodico (lejía) o agua oxigendada. La técnica de usar lejía para este proceso en forma gaseosa/vapores es nueva y viene explicado en el link de la primera entrada. Creo que Fabian también ha puesto un link similar. Mira en su entrada...

    Hay que distinguir entre el trabajo higiénico/aseptico cuando se hace el medio, se pasteriza los frascos, etc. y la decontaminación de las semillas (si no usas capsulas verdes).
  11. M3M0

    M3M0

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    Si eso si, yo me refería a que das un paso donde aplicas una gota de lejía o algo así, ese no lo entendí muy bien, lo demás si, utilizare la capsula verde.
  12. M3M0

    M3M0

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    Una pregunta, si quedo muy liquido y no solidifica, puedo volver a usar el medio en los frascos? como?
  13. arturo uno

    arturo uno dos tres cuatro cinco

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    Si ha quedado muy líquido - esperar un día por lo menos antes de decidir esto! - puedes verter el contenido de los frascos de vuelta a la olla y calentar suavemente, añadiendo un poco de agar (si tienes un tipo de agar que se disuelva bien, añadelo directamente; si no se disuelve con facilidad, disuelve unos gr en agua y añade esta), siempre con cuidado, removiendo, para que no se queme nada (ya que todos los ingredientes están dentro), vuelve a repartir a los frascos, cierra, pasteuriza de nuevo y comprueba al día siguiente si han solidificado bien.

    Las tapas tienen un orificio de 'intercambio de gases' (hay quien trabaja SIN este orificio). Si el orificio estuviera abierto, entrarían esporas eventualmente. Por eso se protege con un algodón (hay un tipo de cierre plástico que parece como una tirita que también se usan, pero son bastante caros). Yo este algodón lo fijo con un trozo de film plastico y un elástico. El algodón lleva una gota de lejía, por si las mosca. NO ES necesario.

    Suerte.
    pacaperez da las Gracias.
  14. pacaperez

    pacaperez Regalame una orquídea que expire todos tus pecados

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    Hola, bueno, mi experimento no es un invitro, es con la actuación del hongo micorriza, pero pongo esto aquí porque es donde se encuentran los expertos en investigación con las semillas, agradecería si pudieran ayudarme, pues de momento no entiendo mucho mis resultados... jajaja ahora me entenderán.
    Las de epidendrum van muy bien, aquí la foto:
    [​IMG]

    Y aquí las que puse poco después de phal... pero no entiendo muy bien. Puse varios tarros, obtuve dos tipos de resultados.
    El primero: Semillas infectadas con el hongo o sin verse hongo, pero no se observa sino un poco de engrosamiento, pero... nada significativo:
    [​IMG]

    El segundo... no tengo muy claro que es, no se si es que se desarrollaron o... vamos, ni idea, esto es lo que se ve:
    [​IMG]

    Agradecería cualquier tipo de ayuda. Gracias.
  15. monstera

    monstera www.orquideoteca.blogspot.com

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    Hola a todos, soy Olivia, del blog orquideoteca, monstera en el anterior infojardin. Loca del cultivo in vitro de orquídeas. Aun no me había registrado en este :-(
    Me leeré con calma toda la charla para ponerme al día. Quería presentarme primero, ya que hay mucha gente, ya no tan nueva, que no conozco.

    Un saludo

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